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cytion細(xì)胞培養(yǎng)解離技術(shù)概述

更新時(shí)間:2023-12-29      點(diǎn)擊次數(shù):1035

細(xì)胞培養(yǎng)物解離是細(xì)胞培養(yǎng)物維持的關(guān)鍵步驟。它涉及將細(xì)胞從其生長(zhǎng)表面分離以進(jìn)行傳代培養(yǎng)或收獲。本節(jié)概述了兩種主要方法:使用無酶解離緩沖液和使用酶試劑。

1. 使用無酶細(xì)胞解離緩沖液

該方法非常溫和,無需使用酶即可保持細(xì)胞完整性:

  1. 準(zhǔn)備

    • 確保所有試劑在使用前加熱至 37°C,以避免對(duì)細(xì)胞造成沖擊。

  2. 去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基:

    • 從培養(yǎng)容器中丟棄舊的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

  3. 漂洗

    • 每個(gè) T75 燒瓶或 100 mm 培養(yǎng)皿用 5 ml 不含鈣和鎂的 PBS 沖洗細(xì)胞單層。

    • 在室溫下輕輕搖動(dòng)容器 30 至 60 秒。

    • 吸出并丟棄沖洗溶液。

    • 再次重復(fù)此沖洗步驟。

  4. 解離

    • 將大約 5 ml 無酶細(xì)胞解離緩沖液添加到容器中。

    • 在室溫下輕輕搖動(dòng) 1 至 2 分鐘,然后在顯微鏡下檢查解離情況。

    • 如有必要,用手輕敲燒瓶或培養(yǎng)皿以去除細(xì)胞。

    • 如果細(xì)胞貼壁,讓它們?cè)谑覝叵略凫o置 2 至 5 分鐘,并根據(jù)需要再次敲擊,使用更多的解離緩沖液。

    • 細(xì)胞分離后,添加至少 5 ml 全生長(zhǎng)培養(yǎng)基以中和解離緩沖液并重懸細(xì)胞。

  5. 活力檢查

    • 在傳代培養(yǎng)過程中監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力,確保其保持在 90% 以上。

2. 使用其他試劑進(jìn)行解離

該方法允許使用各種解離試劑:

  1. 去除用過的介質(zhì)

    • 丟棄培養(yǎng)容器中的舊介質(zhì)。

  2. 洗滌細(xì)胞

    • 用不含鈣和鎂的平衡鹽溶液清洗細(xì)胞,或使用 EDTA。

    • 將洗滌液輕輕添加到細(xì)胞對(duì)面,并搖動(dòng)容器 1 至 2 分鐘,然后丟棄洗滌液。

  3. 解離

    • 每 25 平方厘米的生長(zhǎng)表面涂抹 2 至 3 毫升所選的解離溶液,確保覆蓋細(xì)胞片層。

    • 將容器在 37°C 下孵育并輕輕搖動(dòng)。解離通常發(fā)生在 5 至 15 分鐘內(nèi),具體取決于細(xì)胞系。

    • 對(duì)于頑固的細(xì)胞,敲擊容器可以加快這一過程。

    • 仔細(xì)觀察細(xì)胞以防止過度暴露和潛在的損壞。

  4. 收獲細(xì)胞

    • 一旦細(xì)胞分離,將其直立,讓它們收集在容器底部。

    • 添加完整的培養(yǎng)基,然后通過移液到細(xì)胞層上分散并收集細(xì)胞。

    • 計(jì)數(shù)并繼續(xù)傳代。

在這兩種方法中,重要的是通過經(jīng)驗(yàn)觀察確定每個(gè)細(xì)胞系的最佳條件。該過程應(yīng)保留細(xì)胞活力,在傳代培養(yǎng)過程中應(yīng)定期檢查細(xì)胞活力是否超過 90%。這些程序?yàn)檠芯咳藛T根據(jù)其細(xì)胞系的具體要求和特征進(jìn)行調(diào)整奠定了基礎(chǔ)。


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